发布时间:2022-12-19 15:04:00

 

  牛血清蛋白的测定方法以及用途

  牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别,它不是一定的,而是多聚物的,有的地方测试。

  牛血清白蛋白分子式数据为70 000,这一数据是在做PCR的时候使用的数据。

  牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等电点4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。牛血清蛋白溶液可以作为测量蛋白质含量的标准曲线用。

  一般买回来的牛血清蛋白是细小片状的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以铁为基本原料。

  华远详解用途

  1、特纯级牛血清蛋白

  用途:用作酶标、金标等诊断试剂的封闭剂,生化试验等。

  电场対超感牛血清白蛋白截留率的影响

  性状:淡黄色干燥粉末

  2、无脂肪酸牛血清蛋白

  用途:用作酶标、金标等诊断试剂的封闭剂、保护剂,尤其适用于容易受脂肪酸影响的产品和试验。

  性状:淡黄色干燥粉末

  3、无蛋白酶牛血清蛋白

  用途:用于酶标、金标等诊断试剂的封闭剂、保护剂,尤其适合血液脂类的诊断试验、脂类诊断试剂及对纯度要求高的产品。

  性状:淡黄色干燥粉末

  4、细胞培养级牛血清蛋白

  用途:无血清培养基的蛋白添加剂,供细胞培养使用。

  性状:淡黄色干燥粉末白蛋白

  测定

  标准曲线

  一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此,制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。

  测定方法

  1.凯氏定氮法

  2.双缩脲法

  3.Folin-酚试剂法

  4.紫外吸收法

  5.考马斯亮蓝法

  试剂

  1.考马斯亮蓝试剂:

  考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85%H3PO4,用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。zui终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。

  2.标准蛋白质溶液:

  纯的牛血清血蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

  器材

  1.722S型分光光度计使用及原理。

  2.移液管使用。

  制作步骤

  试管编号0 1 2 3 4 5 6

  100ug/ml标准蛋白(ml)0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

  0.15mol/L NaCl(ml)1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4

  考马斯亮蓝试剂(ml)5 5 5 5 5 5 5

  摇匀,1h内以1号管为空白对照,在595nm处比色

  3、以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标(六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐标轴上绘制标准曲线。

  (1)、利用标准曲线查出回归方程。

  (2)、用公式计算回归方程。

  (3)、或用origin作图,测出回归线性方程。即A595nm=a×X()+6

  一般相关系数应过0.999以上,至少2个9以上。

  (4)、绘图时近两使点在一条直线上,在直线上的点应该在直线两侧。

  含量的测定

  样品即所测蛋白质含量样品(含量应处理在所测范围内),依照操作步骤1操作,测出样品的A595nm,然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。

  一般被测样品的A595nm值在0.1—0.05之间,所以上述样品如果A595nm值太大,可以稀释后再测A595nm值,然后再计算。

  注意事项

  1.玻璃仪器要洗涤干净。

  2.取量要准确。

  3.玻璃仪器要干燥,避免温度变化。

  4.对照:用被测物质以外的物质作空白对照

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