华远解答| PeproTech细胞因子和蛋白常见问题解答(FAQ)

　　标签：细胞因子蛋白生物制剂华远化学

　　1.PeproTech细胞因子和蛋白产品的稳定性如何?

　　答：除非在产品说明书中特别注明，PeproTech的所有产品均为冻干粉，它们在室温条件下非常稳定(至少1个月)。尽管如此，我们还是建议您在收到我们的产品后保存于-20oC，以确保蛋白100%的活性。对于大多数蛋白，重悬后在4oC仅能短期保存(约1周)。如想长期保存，请先配制成稀释液(其中必须含有载体蛋白，如0.1% BSA，5%HSA，或10% FBS)，然后分装冻存于-20oC或-80oC。一定要避免反复冻融，因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。具体、详细的重悬和溶解方法请点击查看，PeproTech细胞因子和重组蛋白溶解必读。

　　2.为什么有时在管中看不到细胞因子或蛋白的冻干粉?

　　答：与市场上的许多蛋白产品不同，PeproTech的产品中均不含载体蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等，并且是以最低含盐量的溶液进行冻干的，因此冻干后常常不能形成白色网架结构，而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内，形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。打开管盖前，我们建议您在小离心机中快速离心20-30秒，使附着在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底。我们的质控步骤保证每管中所含的蛋白量准确无误，虽然有时您无法看到蛋白粉末，但管中的蛋白含量仍是非常精确的。

　　3.ED50和units/mg之间有何关联?

　　答： ED50为半数有效浓度，其定义是可诱导50%最大反应的细胞因子浓度，这种活性表示法仅适用于剂量反应曲线呈S形的细胞因子。其实，可以将ED50的值接理解为1unit。如某种细胞因子或蛋白的ED50为1ng/ml，那么1ng/ml即可看作是1unit。那么我们也不难理解，1mg (1x106ng) 该细胞因子或蛋白中应含1x106/1 = 106units. ED50(ng/ml)转化为units/mg的公式如下：

　　4.如何确定细胞因子的种属交叉活性?

　　答：1) 除少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。

　　2) 许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞，但比活性可能低于对应的人类细胞因子。

　　3) IL-7等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。

　　4) 干扰素，GM-CSF, IL-3和IL-4等细胞因子种属特异，对非同源细胞几乎没有活性。

　　5) 相反，成纤维细胞生长因子(FGFs)和神经营养素(neurotrophins)高度保守，在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。当然，仅凭以上规律无法判断许多其它细胞因子的交叉反应活性。如您在这方面存在疑问，请与PeproTech中国代表处联系，我们会给您准确的答复。

　　5.到底什么是无动物成分(Animal-Free)的重组蛋白?

　　答：诚然，PeproTech生产的重组蛋白均是人或小鼠和大鼠的，又怎么说成是Animal-Free，即无动物成分的呢?真正的原因是：这里的Animal-Free是指在表达人、小鼠或大鼠的重组蛋白的过程中未使用任何动物来源的材料，而不是指被表达的重组蛋白是Animal-Free的。我们知道，重组蛋白通常是用大肠杆菌表达的，而大肠杆菌的培养基中需要添加胰蛋白胨(Trypton)等动物来源的组分，这些组分不可避免的在随后表达出来的重组蛋白中掺入诸多不明的动物成分。虽然最后纯化出来的重组蛋白的纯度可达98%或99%，但另外1%中很可能含有来自胰蛋白胨的其它动物成分，这些动物成分虽然含量极微，但可能在重组蛋白应用于人体或动物时，将其中所含动物病原体(如疯牛病病毒及其它未知病原体)传染给人和动物。而且，这些动物成分中的异源蛋白也会引起人和动物的异体排斥或过敏反应。因此，当重组蛋白在应用过程中可能接触到人体或动物体时(如细胞治疗和动物体内实验等)，请尽量选用Animal-Free的重组蛋白。

　　PeproTech的无动物成分重组蛋白是在独立的完全无动物成分的生产车间中生产出来的，同时生产过程中不会使用到胰蛋白胨等任何含动物成分的培养基或试剂，因此可保证最终的重组蛋白中不含任何动物成分，非常适合于临床前试验和动物研究。 PeproTech的无动物成分产品的产品编号均以AF为前缀。PeproTech现已有44种无动物成分的人、小鼠和大鼠重组蛋白，并在不断快速增加。而且有些常用的细胞因子，如人EGF(表皮生长因子)已经完全采用无动物成分的生产方式，即不再提供含动物成分的人EGF。

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