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　　Bradford法蛋白定量试剂盒技术资料

　　一、Bradford法蛋白定量试剂盒简介 目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford法蛋白定量试剂盒(Bradford Protein Assay Kit) 。Bradford 法与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更好。 Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。但受高浓度的去垢剂的影响， 故在用Bradford Protein Assay Kit进行蛋白定量的时候，需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用Leagene BCA Protein Assay Kit。 Leagene Bradford Protein Assay Kit检测速度很快，少量样品一般只需10min即可完成检测。检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl。在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

　　二、Bradford法蛋白定量试剂盒组成 试剂(A): G250染色液 100m 200ml 4℃ 避光 试剂(B): 蛋白标准(BSA 5mg/ml) 1ml 2ml -20℃ Bradford法蛋白定量试剂盒主要成分： 试剂(A): 主要由G250、缓冲液等组成。 试剂(B): 主要由牛血清白蛋白(BSA)、防腐剂等组成。

　　三、自备材料

　　1、 酶标仪或分光光度计

　　2、 微量移液器

　　3、 双蒸水

　　4、 96孔板 操作步骤(仅供参考)：

　　1、 完全溶解蛋白标准(BSA 5mg/ml)，按蛋白标准:稀释液=1:9进行稀释，如取蛋白标准10μl稀释溶解于稀释液90μl，使终浓度为0.5mg/ml。注意，蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也宜用什么溶液稀释。也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准(BSA 5mg/ml)。

　　2、 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释 液补足到20μl。

　　3、 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液到20μl。

　　4、 各孔加入200μl G250染色液，室温放置3～5min。

　　5、 用酶标仪测定A595，或560~610nm之间的其它波长的吸光度。

　　6、 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

　　四、Bradford法蛋白定量试剂盒操作

　　注意事项

　　1、 G250染色液使用前充分混匀。

　　2、 G250染色液回复至室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。

　　3、 蛋白标准在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。

　　4、 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。

　　5、 需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm，并需96孔板。

　　6、 建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

　　7、 如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

　　8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期： 12个月有效。

　　Bradford法蛋白定量试剂盒技术资料华远公司主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。