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　　如何制备HEPES缓冲液?华远教您小技巧？

　　Hepes是一种通用的两性离子缓冲剂，不结合镁，钙，锰或铜离子。其中细胞培养应用的缓冲液强度通常在10至25mm之间，在加入Hepes后，用NaOH或HCl调节pH。必须注意保持培养基中的重量克分子渗透压浓度，并且需要评估对于给定细胞系的毒性。根据文献得到，HEPES在控制pH方面优于碳酸氢钠。

　　Hepes的缓冲液可以通过好几种方法来制备，可以将游离酸添加到水中，然后用大约一半摩尔当量的氢氧化钠或氢氧化钾滴定至所需的pH。或者，相等摩尔浓度的Hepes和Hepes钠盐，可以将它们以大约相等的体积混合，然后用任一种溶液反滴定至合适的pH。可以用HCL滴定钠盐，得到一半当量的氯化钠。但是，离子强度的增加会改变溶液的重量克分子渗透压浓度。Hepes半钠的大多数溶液都会溶解在水中，形成pH值7.5，几乎不用做调整。

　　Hepes缓冲盐水(2X)的俩种配方：

　　1、氯化钠1.6克

　　氯化钾0.074克

　　Na2HPO4二水合物0.027克

　　葡萄糖0.2克

　　HEPES，游离酸1克

　　将上述成分溶解在总体积为90毫升的蒸馏水中，用0.5 N NaOH调节pH到7.05，然后调节用蒸馏水定容至100毫升。通过0.22微米的过滤器对溶液进行灭菌，分装在-20°C下。

　　2、氯化钠16.4克

　　HEPES，游离酸11.9 g

　　Na2HPO4 0.21克

　　水 1升

　　加入上述成分并搅拌直至溶解，用5 M NaOH滴定至pH 7.05(准确的pH值非常重要)，筛选消毒。

　　在与转染实验一起使用之前测试制剂，通过将0.5 ml的上述缓冲液与0.5 ml的250 mM CaCl2混合并涡旋进行测试。应形成细的沉淀物，该沉淀物在显微镜下很容易看到。如果没有形成沉淀，不要将这批缓冲液用于转染实验。

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