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　　RNA提取的基本原则及操作步骤？

　　华远小编今天给大家带来《qRT-PCR》之---如何提取细胞RNA!

　　一、基本原则

　　避免RNA酶污染，全程戴口罩和无菌乳胶手套(汗液和唾液中含有大量RNA酶)

　　二、主要试剂及仪器

　　Trizol、氯仿(三氯甲烷)、异丙醇、无水乙醇、DEPC水(或ddH2O)

　　三、操作步骤(全程戴口罩和手套)

　　1、Trizol处理。将细胞培养基吸出后，用预冷PBS洗涤3次，加入1ml Trizol(100mm培养皿)，室温裂解1-2min，用移液枪均匀吹下细胞并置于无菌1.5ml EP管，上下轻柔颠倒数次，室温静置5min。

　　2、加入1/5体积氯仿，颠倒混匀10次，室温静置5min，4度，12000rmp，离心20min。(离心机提前预冷至4度)

　　3、将水相转移至新EP 管(缓吸、宁缺毋滥)，加入等体积异丙醇，颠倒混匀10次，室温静置10min，4度，12000rmp，离心15min。

　　4、用真空泵或移液枪小心吸取上清液，加入预冷75%乙醇(无水乙醇配置)， 4度，12000rmp，离心10min。

　　5、弃上清液，EP管倒扣，空气干燥5~10min。

　　6、10~100ul DEPC水 (或ddH2O)溶解。

　　7、NanoDrop 2000超微量分光光度计定量，读取OD260/OD280比值。若比值在1.8~2.0之间，可进行下一步逆转录反应，若低于1.8，可能存在蛋白污染。

　　8、若暂时不逆转录，RNA置于-80度冰箱保存。

　　RNA提取的基本原则及操作步骤? 华远公司主要业务为向大专院校、科研机构，药企、化工企业提供高品质、特殊规格的化学产品和技术解决方案，已经形成了累计服务超过1000家客户，提供高规格产品超过6000种，合作行业和产业伙伴超过1200家的体量和规模，积累了丰富的经验和良好的口碑。基于长期的行业经验和积累，我司已经形成了既能满足研发类客户对产品种类、包装、纯度的特殊要求，也能适应企业从小试、中试到规模化等各个阶段的综合需求的核心能力。