发布时间:2021-11-29 15:10:00

高效RIPA 组织/细胞裂解液使用说明书

规格:20ml/100ml

        本产品配有一支 PMSF(0.3ml/1.5ml)

保存:RIPA 裂解液 4℃保存,PMSF-20 ℃保存。

使⽤说明:

        如发现 RIPA 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

如发现 RIPA 有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量,取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。

1、样品前处理:

a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入

150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250 ul 裂解

液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,

必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。

c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。

(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。

用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

2、后处理:

将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western

blotting 和免疫沉淀等操作。

注意事项:

本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,若细

胞量多会造成细胞裂解液粘稠:此时可以直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若

想测定浓度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污

剂,所以不适合使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒,请选择 BCA 法或者 Lowry 法检测蛋白浓度。

如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清

用于后续实验。

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