细胞培养起来感觉会很简单,但是有时候也会出现各种不顺的问题 ,例如:污染,生长缓慢,变形,死亡率过高…..,毕竟细胞是体外培养的,在培养的时候会受到各种外界因素的影响,培养基、血清、孵育温度、C02浓度等,除此之外还有抗生素……
一般来说细胞培养是不需要加抗生素,因为细胞培养必须要无菌操作。如果实验室污染严重,建议彻底打扫一下,擦拭消毒、熏蒸或者紫外照射杀菌。然后把细胞实验涉及到的试剂都做下空培,包括使用的胰酶,胎牛血清等。如果实验室无菌条件优异,细胞培养可以不加抗生素,因为抗生素的药效水平和毒性水平非常接近。特别是用于细胞治疗的培养。
若当心细胞感染,可以适当添加一些抗生素预防,如果已经有污染,建议按照以下方案添加:
1、最常用的是青霉素、链霉素联合抑制细菌,即所谓的“双抗”,主要针对革兰氏阳性菌、阴性菌;对于细菌的感染也可用庆大或卡那霉素;
2、如果真菌污染严重,可用两性霉素/制霉菌素控制;
3、若为支原体污染, 可以用华远化学的支原体抑制剂,包装简洁,10ug/支 ,使用方便。在培养基中加入新鲜的支原体抑制剂溶液,每3-4天更换一次。一两周内的足以消除污染。可以有效的可以查杀各种原因感染的支原体。
抗生素多加对细胞无益。加抗生素的主要问题是操作不慎造成的污染未必能及时发现,造成后期较大的损失。
青链霉素是广谱抑菌剂,对革兰氏阴性和阳性细菌有抗菌性,青霉素影响细菌细胞壁合成的终末步骤,在转肽反应步骤一直多肽链的延伸;链霉素与核糖体的30S亚基单位结合,阻断细菌蛋白质的组成。比较常用 。一般用于哺乳动物细胞培养。
一旦细胞污染,最佳处理办法扔掉,查找原因,全面预防。如果细胞是经过大量工作或高价才得到的,扔掉实在可惜,可以针对污染源加抗生素。也可以不加抗生素进行单克隆有限稀释至96孔板,再克隆化。
但是污染带来的实验影响和损失不可估量,最主要的是平常都要做好细胞房的管理和消毒工作。防止污染的发生。