发布时间:2022-03-31 23:10:00

缓冲液的品种非常多,比如常见的有HEPES缓冲液,磷酸盐缓冲液,Tris缓冲液,甘氨酸缓冲液,虽然我们都知道这些缓冲液有很多的优点,但同时也有着不可避免的缺点;本文将为您一一进行揭晓,我们只有把这些问题弄清楚了,才可以更加清楚的去选择适合的缓冲液。

 

如何选择缓冲液, 缓冲液有什么优点及缺点

一般来说,在选择缓冲液时,我们需要遵循以下几个要求,特别是需要确定该缓冲液所需的PH值,具体如何选择请参考下面说明:

选择缓冲体系,其解离常数pKa值应该在设定的pH上下一个pH值单位内,因为缓冲液的pKa变化超过一个pH单位时,其缓冲能力就会明显下降;

缓冲体系不应影响蛋白质的活性或者DNA的稳定性,并避免其他离子的干扰;

最后,还要考虑温度的影响:温度不仅对缓冲液有影响,对细胞也有影响,大多数动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.0~7.5,而在温度下降到0℃时可达到8.0。


那么缓冲液有什么优点及缺点有哪些呢?由于缓冲液的品种特别多,所以我们拿出几个系列的产品作详细讲述!
 

磷酸盐缓冲液的优点及缺点:

磷酸盐缓冲液是使用最为广泛的一种缓冲剂,由于它有二级解离,所以缓冲的pH值范围很广,可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。

A、优点

易配成各种浓度

适用pH范围宽

pH受温度影响小

稀释后pH变化小

B、缺点

易与常见的钙离子、镁离子及重金属离子缔合成沉淀

Tris缓冲液的优点及缺点

Tris缓冲液是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围。

A、优点

碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的但范围pH缓冲液;

对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

B、缺点

pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1

温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4

易吸收空气中的二氧化碳

HEPES缓冲液的优点及缺点

HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。

A、优点

在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值,并对细胞无毒性作用。

B、缺点

在高浓度时对一些细胞可能有毒,与其他缓冲剂相比价格略贵。


更多缓冲液的优点及缺点详情请来电联系上海远慕生化试剂厂家,本司所供应的缓冲液产品满足于用户需求,下面我们一起来了解下HEPES缓冲液的配制方法。

 

HEPES缓冲液的配制方法

一、500ml 1 MHEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值,最后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有两种:

A、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH 调pH至7.2,滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。

B、亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L),使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液,最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存。

需要注意的是,HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L,对细胞无毒性作用。一般情况下,浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶,大家根据实际情况正确灵活配制就可以。

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